曲霉屬通用PCR試劑盒的樣本處理方法分享
點(diǎn)擊次數(shù)：1315 更新時(shí)間：2022-02-23
曲霉屬通用PCR試劑盒利用DNA擴(kuò)增的線(xiàn)性原理，可以測(cè)定樣品中已知序列的絕對(duì)或相對(duì)量。qPCR會(huì)監(jiān)測(cè)每個(gè)PCR循環(huán)中的DNA擴(kuò)增。當(dāng)DNA處于對(duì)數(shù)線(xiàn)性擴(kuò)增階段時(shí)，熒光量相對(duì)于背景增加。熒光積累至可測(cè)的那一點(diǎn)稱(chēng)為閾值循環(huán)(CT)或交叉點(diǎn)。通過(guò)使用已知量的標(biāo)準(zhǔn)DNA的多次稀釋?zhuān)梢援a(chǎn)生對(duì)比CT的對(duì)數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
今天小編要與大家分享的是曲霉屬通用PCR試劑盒的樣本處理方法：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
